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有關(guān)PCR反應(yīng)污染幾個原因
點擊次數(shù):1334 更新時間:2021-12-22

PCR反應(yīng)的最大特點是具有較大擴(kuò)增能力與*的靈敏性,但令人頭痛的問題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。

一、標(biāo)本間交叉污染

標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染,或標(biāo)本放置時,由于密封不嚴(yán)溢于容器外,或容器外粘有標(biāo) 本而造成相互間交叉污染;標(biāo)本核酸模板在提取過程中,由于吸樣槍污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染;有些微生物標(biāo)本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴(kuò)散,導(dǎo)致彼此間的污染.


二、PCR試劑的污染

主要是由于在PCR試劑配制過程中,由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染. 


三、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染

這是PCR反應(yīng)中最主要最常見的污染問題.因為PCR產(chǎn)物拷貝量大(一般為1013拷貝/ml),遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于   PCR檢測數(shù)個拷貝的極限,所以極微量的PCR產(chǎn)物污染,就可造成假陽就可形成假陽性.
還有一種容易忽視,最可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染;在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠,在操作時比較劇烈地?fù)u動反應(yīng)管,開蓋時、吸樣時及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染.據(jù)計算一個氣溶膠顆??珊?8000拷貝,因而由其造成的污染是一個值得特別重視的問題.
  

四、實驗室中克隆質(zhì)粒的污染

分子生物學(xué)實驗室及某些用克隆質(zhì)粒做陽性對照的檢驗室,這個問題也比較常見.因為克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當(dāng)高,另外在純化過程中需用較多的用具及試劑,而且在活細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)粒,由于活細(xì)胞的生長繁殖的簡便性及具有很強(qiáng)的生命力.其污染可能性也很大.

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