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制作劃痕實(shí)驗(yàn)需要注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù):526 更新時(shí)間:2023-12-04

      傷口愈合試驗(yàn),也通常稱為“劃痕試驗(yàn)",是一種廣泛建立的研究體外集體細(xì)胞遷移的技術(shù)。細(xì)胞劃痕(Wound Healing)是一種操作簡單,經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。其實(shí)驗(yàn)原理是,當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時(shí),在融合的單層細(xì)胞上人為一個(gè)空白區(qū)域,稱為“劃痕"。劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕"愈合。

      條件好的實(shí)驗(yàn)室可以使用活細(xì)胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)中角質(zhì)形成細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞的遷移活動(dòng)。結(jié)合包含的軟件分析算法,有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時(shí)間的速度。使用延時(shí)顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點(diǎn)是,可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析。

      通常,用于傷口愈合試驗(yàn)的細(xì)胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細(xì)胞系和原代細(xì)胞經(jīng)常被用作這方面的模型。蕞常用的細(xì)胞類型是角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。

       條件好的實(shí)驗(yàn)室可以使用活細(xì)胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)中角質(zhì)形成細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞的遷移活動(dòng)。結(jié)合包含的軟件分析算法,有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時(shí)間的速度。使用延時(shí)顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點(diǎn)是,可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析。

       通常,用于傷口愈合試驗(yàn)的細(xì)胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細(xì)胞系和原代細(xì)胞經(jīng)常被用作這方面的模型。蕞常用的細(xì)胞類型是角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。

制作劃痕實(shí)驗(yàn)需要注意:

1. 細(xì)胞的密度;劃痕實(shí)驗(yàn)一般是幾種細(xì)胞的結(jié)合,但是每種細(xì)胞的生長速度會(huì)不一樣,所以需要按照細(xì)胞的生長特性調(diào)整培養(yǎng)時(shí)間,細(xì)胞鋪滿孔底時(shí)劃痕的效果會(huì)比較好,建議是100%的鋪滿。

2. 用槍頭畫線時(shí)盡量垂直,以6孔板為例 ,一個(gè)孔可以畫6條線。

3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次,以去除劃下的細(xì)胞。

4. 注意培養(yǎng)方式一定要改成無血清或者低血清的培養(yǎng)基,因?yàn)椋簞澓酆笥脽o血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,意在說明在監(jiān)測(cè)的 24 小時(shí)內(nèi),劃痕的縮小是細(xì)胞 遷移作用的結(jié)果,所以要將細(xì)胞增殖造成細(xì)胞遷移的影響降到蕞低;但若細(xì)胞改成無血清培養(yǎng)后大面積漂浮,需要適量加入血清濃度不能高于2%。

5. 放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱,培養(yǎng)??砂?,10,12,15時(shí)間點(diǎn)取樣,拍照(具體時(shí)間依實(shí)驗(yàn)需要而定)。

6. 統(tǒng)計(jì)方法:使用Image J軟件打開圖片后,抓取自己畫的線條,計(jì)算細(xì)胞間距離的平均值。


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