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免疫學(xué)工具酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、免疫組化、WB講解
點擊次數(shù):76 更新時間:2025-03-03

酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA

用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色,待測的樣品多是血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液,因而沒有用到組織包埋、切片等技術(shù),這是與免疫組化的主要區(qū)別,操作上 開始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面,從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上,這就是“吸附"的含義。

免疫組化和elisa所用到的原理 大致相同,只是因為所檢測的樣品不同,從而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析,其靈敏度非常高。

免疫組化:

是融合了免疫學(xué)原理(抗原抗體特異性結(jié)合)和組織學(xué)技術(shù)(組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等),通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色,來對組織(細(xì)胞)內(nèi)抗原進行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細(xì)胞或組織,要在顯微鏡下觀察結(jié)果,可能出現(xiàn)膜陽性、質(zhì)陽性和核陽性。                                

western bolt (wb):

先要進行SDS-PAGE,然后將分離開的蛋白質(zhì)樣品用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)移到固相載體上,而后利用抗原-抗體-標(biāo)記物顯色來檢測樣品,可以用于定性和半定量。


免疫學(xué)三大工具,免疫組化、Western bolt (wb)、ELISA,分別用于定位,定性和定量。
western blotting(wb) 可以看到特異性的條帶,但是定量比較煩:
elisa可以直接讀出濃度,但是如果抗體有非特異性結(jié)合,那得到的數(shù)值就不可信。
WB只能半定量,但是可以檢測細(xì)胞膜蛋白,這點ELISA做不到,ELISA可用定量方法檢測蛋白,也就是說可以觀察不同濃度刺激物對目的蛋白的影響,WB所檢測的一般是抗原,而Elisa抗原抗體都可以檢測。
WB所檢測的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚體、降解產(chǎn)物等,一句話,WB可以確定所用抗體是與那種蛋白起作用的;而Elisa無能為力,一鍋端了。
WB所適用的一抗一般是線性位點的,ELISA線性或構(gòu)象型抗體都可以使用。從另一個意義上講,WB可以做抗體是線性位點還是構(gòu)象型位點的補充判定,而Elisa不行。WB一次處理量就是一塊膠版,10-20個樣品最多了。Elisa一塊96孔板一次可以處理96個樣本,可以設(shè)置多個復(fù)孔、對照、梯度樣等來提高檢測的可信度。WB操作常見的非特異性條帶,膜本底差,顯色不好等等缺點在Elisa上表現(xiàn)得要好得多。



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