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染料法PCR試劑盒的使用注意事項(xiàng)及操作條件的選擇說(shuō)明
點(diǎn)擊次數(shù):828 更新時(shí)間:2019-11-20
   染料法PCR試劑盒的使用注意事項(xiàng)及操作條件的選擇說(shuō)明
  染料法PCR試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
  染料法PCR試劑盒的使用注意事項(xiàng):
  1、染料法PCR試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
  2、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
  3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
  4、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高,請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以總稀釋倍數(shù)。
  5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  6、染料法PCR試劑盒的底物請(qǐng)避光保存。
  7、嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
  8、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
  在進(jìn)行染料法PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí),各項(xiàng)條件的選擇也是非常重要的:
  1、固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚苯乙烯、纖維素等。其形式可以是凹孔平板、珠粒等。目前常用的是四十孔的聚苯乙烯凹孔板。不論使用哪一種載體,在使用前進(jìn)行篩選:在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)的均一性如何,以此來(lái)判斷其吸附性能是否良好。
  2、包被抗體的選擇:將抗體吸附在固相載體表面的時(shí)候,一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度,進(jìn)行包被后,當(dāng)其它試驗(yàn)條件大致一樣的情況下,觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇蛋白量少,OD值大的濃度。
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