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磁珠

簡(jiǎn)要描述:

磁珠公司正在出售的產(chǎn)品:小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞RFP熒光穩(wěn)轉(zhuǎn)株 RNA結(jié)合蛋白15封閉多肽 黃曲霉PCR檢測(cè)試劑盒 大鼠抗酒石性磷5b(TRACP-5b)試劑盒 ELISA γ氨基丁(GABA)活性比色法檢測(cè)試劑盒 蘆葦凸臍蠕孢 泛蛋白連接G2抗體

更新時(shí)間:2024-01-12

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磁珠

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

A-Hc2052

磁珠

5ml

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PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備?

試劑:
模板DNA:PCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物,分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為T(mén)A克隆等過(guò)程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥(niǎo)苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過(guò)程,用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增;Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類(lèi)的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴(kuò)增DNA鏈;PCR buffer溶液:對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛,可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;酶切體系:PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟,常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),用來(lái)判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;
設(shè)備:
PCR儀:用于控制反應(yīng)溫度,保證PCR反應(yīng)時(shí)不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制;電泳槽:用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動(dòng)提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn):

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個(gè)循環(huán)組成,每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟:

一、變性:

利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個(gè)循環(huán)之前,通常加熱長(zhǎng)一些時(shí)間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時(shí)間1-2分鐘,接下來(lái)PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。

二、退火或稱(chēng)接合,復(fù)性:

在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯(cuò)誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合。該步驟時(shí)間1-2分鐘。

三、延伸:

DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開(kāi)始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴(lài)于DNA聚合酶。該步驟時(shí)間依賴(lài)于聚合酶以及需要合成的DNA片段長(zhǎng)度。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min、較新的Tbr(來(lái)自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化:

1、變性溫度和時(shí)間:

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜WC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再?gòu)?fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過(guò)高或高溫持續(xù)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),可對(duì)Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2、復(fù)性溫度和時(shí)間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過(guò)程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高,產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3、延伸溫度和時(shí)間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí),過(guò)高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時(shí)間,可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長(zhǎng)延伸時(shí)間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時(shí)間。這里需要注意,延伸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時(shí)間。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說(shuō)20?25次循環(huán)后,PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴(kuò)增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品:

豬麻疹病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

抵抗樣分子βELISA試劑盒 RELM-β免費(fèi)代測(cè)試劑

綿羊腺病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

車(chē)前子染料法PCR鑒定試劑盒

補(bǔ)體成分4dELISA試劑盒 C4d免費(fèi)代測(cè)試劑

人偏肺病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

杏仁PCR檢測(cè)試劑盒

接觸蛋白6ELISA試劑盒

莫佩亞病毒PCR檢測(cè)試劑盒

黃頭桿狀病毒PCR檢測(cè)試劑盒

不均一核核糖核蛋白UELISA試劑盒

莫巴拉病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

龍膽探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒

叢狀蛋白B2ELISA試劑盒

魯氏不動(dòng)桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

犬艾利希體(犬埃立克體)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

單純皰疹病毒型抗體IgGELISA試劑盒

豬、牛、羊布魯氏菌病PCR檢測(cè)試劑盒

犬附紅細(xì)胞體(犬嗜血支原體)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

蛋白O-巖藻糖基轉(zhuǎn)移2ELISA試劑盒

牛紐布病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

流感嗜血桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

蛋白酪氨磷受體RELISA試劑盒

麻疹病毒 / 風(fēng)疹病毒 / 腮腺炎病毒核檢測(cè)試劑盒(三重?zé)晒?PCR )

淋病奈瑟菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

電壓門(mén)控鉀通道ELISA試劑盒

牡蠣皰疹病毒(OsHV)PCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR)

禽腺病毒PCR檢測(cè)試劑盒

多巴脫羧ELISA試劑盒

莫拉氏菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒

克柔假絲酵母核檢測(cè)試劑盒

人瓜氨ELISA試劑盒

牛紐布病毒PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)

禽白血病病毒B亞群探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

人抗腎小管基底膜抗體(TBM)ELISA檢測(cè)試劑盒

佛手探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒

剛果嗜皮菌染料法熒光定量PCR試劑盒

磁珠人肺表面活性蛋白D(SP-D)試劑盒ELISA

美人魚(yú)發(fā)光桿菌PCR檢測(cè)試劑盒

泰國(guó)利什曼原蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒

P鈣黏蛋白/胎盤(pán)鈣黏蛋白(P-cad)ELISA檢測(cè)試劑盒

柏氏巴貝斯蟲(chóng)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

魚(yú)特定基因序列PCR檢測(cè)試劑盒

人百日咳毒(PT)試劑盒 ELISA

牛皰疹病毒3型探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒(暫停)

 


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